
您的位置:網(wǎng)站首頁(yè) > 技術(shù)文章 > 交鏈孢酚和交鏈孢酚單甲醚同時(shí)檢測(cè),前處理這根柱子一步到位 一、AOH和AME,為什么越來(lái)越頻繁地出現(xiàn)在檢測(cè)清單里?
在真菌毒素檢測(cè)的日常工作中,交鏈孢酚(AOH)和交鏈孢酚單甲醚(AME)這兩個(gè)名字正從文獻(xiàn)走向?qū)嶒?yàn)室。它們由交鏈孢霉屬真菌產(chǎn)生,這類(lèi)霉菌在田間廣泛存在,小麥、大麥、玉米、番茄、蘋(píng)果、堅(jiān)果等作物在生長(zhǎng)期間就可能被侵染。毒素隨原料進(jìn)入加工環(huán)節(jié),不易通過(guò)常規(guī)清洗或加熱去除。
越來(lái)越多的出口食品企業(yè)、第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)和供應(yīng)鏈品控部門(mén)開(kāi)始關(guān)注這兩個(gè)毒素??蛻舻囊笤谏?jí),檢測(cè)能力需要跟上。但真正開(kāi)始做AOH和AME檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室很快會(huì)發(fā)現(xiàn),這兩個(gè)項(xiàng)目的前處理,比想象中麻煩。
二、前處理的兩道坎:基質(zhì)干擾重,毒素濃度低
AOH和AME的檢測(cè)通常采用LC-MS/MS法,方法框架不復(fù)雜,難的是把樣品處理干凈。
第一道坎:基質(zhì)干擾。 谷物、番茄制品、果汁、堅(jiān)果等樣品中富含酚酸類(lèi)、黃酮類(lèi)等次生代謝物。這些物質(zhì)的化學(xué)性質(zhì)與AOH和AME相近,在前處理中容易與目標(biāo)物共流出。凈化不che底時(shí),質(zhì)譜上會(huì)出現(xiàn)基質(zhì)抑制或增強(qiáng),定量結(jié)果偏差明顯。對(duì)于低濃度樣品,基質(zhì)干擾的影響會(huì)被進(jìn)一步放大。
第二道坎:濃度低。 交鏈孢霉毒素在樣品中的污染水平多為μg/kg級(jí),部分樣品甚至更低。低濃度意味著前處理既要充分富集,又要嚴(yán)格控制凈化損失。普通SPE柱選擇性有限,共流出干擾多;直接進(jìn)樣則儀器污染風(fēng)險(xiǎn)和基質(zhì)效應(yīng)都難以控制。
免疫親和柱是應(yīng)對(duì)這類(lèi)“低濃度、高干擾"目標(biāo)的可靠選擇。它基于抗原抗體特異性結(jié)合,只保留目標(biāo)毒素,對(duì)結(jié)構(gòu)類(lèi)似物和基質(zhì)干擾物的保留極弱,能從復(fù)雜基質(zhì)中高效富集AOH和AME,同時(shí)把干擾zui低。過(guò)柱后的樣液潔凈度高,進(jìn)入LC-MS/MS后離子源維護(hù)周期更長(zhǎng),數(shù)據(jù)也更穩(wěn)定。
三、普瑞邦A(yù)OH&AME免疫親和柱的產(chǎn)品設(shè)計(jì)
普瑞邦(Pribolab)推出的AOH&AME免疫親和柱,核心解決的是“兩個(gè)毒素、一次過(guò)柱、同時(shí)回收"的問(wèn)題。
抗體同時(shí)覆蓋AOH和AME。 親和柱采用對(duì)兩種組分均有良好交叉識(shí)別能力的單克隆抗體。檢測(cè)需要同時(shí)報(bào)告AOH和AME時(shí),不需要分別過(guò)兩根不同的柱子,一次過(guò)柱即可完成兩種毒素的富集和凈化,前處理時(shí)間壓縮近一半。
凈化針對(duì)典型基質(zhì)驗(yàn)證。 在谷物、番茄制品、果汁等常見(jiàn)樣品類(lèi)型上做了基質(zhì)驗(yàn)證,對(duì)酚酸類(lèi)、黃酮類(lèi)干擾物的保留率低。過(guò)柱后樣液澄清,適用于直接進(jìn)LC-MS/MS分析,減少基質(zhì)效應(yīng)帶來(lái)的信號(hào)波動(dòng)。
操作與常規(guī)親和柱一致。 活化、上樣、淋洗、洗脫四步,流程和實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)在用的黃曲霉毒素親和柱相同,不需要額外培訓(xùn)。上樣液有機(jī)溶劑濃度同樣控制在甲醇不超過(guò)10%、乙腈不超過(guò)20%,上樣和洗脫流速1到2滴每秒?,F(xiàn)有泵流操作架和自動(dòng)化免疫親和操作儀可直接配套使用,不需要調(diào)整設(shè)備。
回收率與批間一致性。 柱容量和回收率按照真菌毒素免疫親和柱的行業(yè)通用標(biāo)準(zhǔn)設(shè)計(jì),回收率穩(wěn)定在可接受范圍,批間一致性好,適合納入日常質(zhì)控體系。
四、哪些實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)在就需要這根柱子?
出口型食品企業(yè)。 產(chǎn)品原料涉及小麥、大麥、玉米、番茄、蘋(píng)果、堅(jiān)果等交鏈孢霉高風(fēng)險(xiǎn)作物的企業(yè),客戶對(duì)AOH和AME的檢測(cè)要求正在增加。提前配置對(duì)應(yīng)前處理耗材,接到檢測(cè)需求時(shí)能快速響應(yīng),不用臨時(shí)摸索方法。
第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)。 交鏈孢霉毒素的檢測(cè)覆蓋率在第三方實(shí)驗(yàn)室中還有較大提升空間。AOH&AME免疫親和柱配合LC-MS/MS,是快速建立該檢測(cè)項(xiàng)目的高效路徑。方法建立后,可為多個(gè)行業(yè)的客戶提供差異化服務(wù)。
科研與風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估機(jī)構(gòu)。 需要積累交鏈孢霉毒素污染數(shù)據(jù)的團(tuán)隊(duì),標(biāo)準(zhǔn)化的前處理工具能讓不同實(shí)驗(yàn)室之間的數(shù)據(jù)更具可比性,避免因前處理差異帶來(lái)的結(jié)果偏差。
AOH和AME的檢測(cè)需求正在上升,前處理是實(shí)驗(yàn)室能否穩(wěn)定開(kāi)展的關(guān)鍵。普瑞邦A(yù)OH&AME免疫親和柱,用一根柱子同時(shí)解決兩種毒素的富集與凈化,讓這個(gè)項(xiàng)目的日常檢測(cè)不再繁瑣。
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